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那这样就没办法确实有效期了吗？我们一般规定化学试剂开封后的有效期，因为按生产日期规定有效期是不合适的，有很多试剂可能买进来时就快过期了。有效期可以按稳定的和不稳定的来区分，sigma试剂尿素，对于稳定的，是指那些不易被氧化、降解、吸湿、脱水的试剂，这类试剂可以规定得有效期时间长一些，当然这也可以结合使用频率和使用量的情况；对于不稳定性的试剂，则要根据检验需求来确定合适的有效期，而这些可能往往来源于检验偏差和oos。因为在成本允许的情况，大家都不想去做试剂稳定性试验来确定开封后的有效期。

3~5分子的生物素与1分子的蛋白结合实验实验步骤：

1. 溶解2~10 mg 蛋白于1 ml 的buphtm磷酸盐缓冲液中，并计算溶解的毫摩尔数。如果蛋白含有不恰当的缓冲液（如tris或者甘氨酸），可以通过在pbs中透析或浓缩的方法除去。计算：蛋白（mg）/蛋白分子量（mw）＝蛋白质的毫摩尔数。

2. 在打开之前，平衡生物素至室温。加2 mg sulfo-nhs-biotin于100 ul 超纯水中，加入足够量浓度的生物素，sigma试剂尿素经销商，一般对于10 mg/ml 蛋白来说超过12倍分子数，对于2 mg/ml 蛋白溶液应超过20倍，或者该试剂也可以直接以粉末的形式加入蛋白溶液中

3. 室温30分钟，或冰上放置2小时。

4. 用30 ml pbs预洗纯化柱，上样，加入与欲收集量相同的缓冲液，收集0.5 ml 或1 ml 于单独的管中。