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在全自动生化分析仪使用中,我们发现一个项目会影响紧随其后项目的测试结果,造成这种影响的原因之一是一种实际中含有另一试验的测定物质而直接干扰其测试结果。比如:在tp试剂中含有大量的cuso4,如果将cu放在tp项目的后面检测,会使检测结果偏高或重复性差。再如p放在含有磷酸盐的项目后面,tba放在含有胆酸盐的项目后面都会使检测结果偏高或重复性差。
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仪器检测中一般选择优级纯或试剂,测定微量成分时应选用高纯试剂。配制定量或定性检测中的普通试液和清洁液时应选用化学纯试剂。需要注意的是,sigma试剂尿素购买,试剂的级别要求高,检测实验用水的纯度及容器、仪器洁净程度也有特殊要求,必须配合使用,方能满足要求此外,由于进口化学试剂的规格、标志与我国化学试剂现行等级标准不甚相同,使用时可参照有关化学手册加以区别。
3~5分子的生物素与1分子的蛋白结合实验实验步骤:
1. 溶解2~10 mg 蛋白于1 ml 的buphtm磷酸盐缓冲液中,并计算溶解的毫摩尔数。如果蛋白含有不恰当的缓冲液(如tris或者甘氨酸),可以通过在pbs中透析或浓缩的方法除去。计算:蛋白(mg)/蛋白分子量(mw)=蛋白质的毫摩尔数。
2. 在打开之前,平衡生物素至室温。加2 mg sulfo-nhs-biotin于100 ul 超纯水中,加入足够量浓度的生物素,一般对于10 mg/ml 蛋白来说超过12倍分子数,对于2 mg/ml 蛋白溶液应超过20倍,或者该试剂也可以直接以粉末的形式加入蛋白溶液中
3. 室温30分钟,天津sigma试剂尿素,或冰上放置2小时。
4. 用30 ml pbs预洗纯化柱,上样,加入与欲收集量相同的缓冲液,收集0.5 ml 或1 ml 于单独的管中。
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